昆虫细胞蛋白表达服务

杆状病毒表达载体系统(baculovirus expression vector system,BEVS)是当今基因工程四大表达系统之一。BEVS属于真核表达系统,通过BEVS得到的重组病毒易于筛选、具有翻译后修饰功能、表达外源基因的效率较高。BEVS还可以同时表达多个外源基因,在分泌蛋白生物活性的同时增加产量。因此,BEVS在科研和工业生产中通常应用于大规模重组蛋白的制备。

实验流程

昆虫细胞蛋白表达服务流程图

实验步骤 实验内容
密码子优化及基因合成 分析基因序列,优化密码子,合成目的基因,提供载体
重组质粒构建 构建含有目的基因的载体质粒
重组杆状病毒载体构建 将目的基因亚克隆到合适的杆状病毒转移载体上
重组杆状病毒扩大培养 转染昆虫细胞,制备病毒贮液,空斑实验测定病毒滴度
表达条件优化 检测并优化表达条件(细胞株、MOI、时间温度等)
大规模杆状病毒昆虫细胞培养 根据优化条件,可提供大规模细胞培养
蛋白分析和纯化 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
通过亲和层析,离子交换,疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。
去除不需要的纯化标签。

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